細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供最新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項(xiàng)：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

SCARB2 Others Mouse 小鼠 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) FastredBsalt1,5-disulfonate2-甲氧基-4-硝基-本重氮1,5-奈二磺酸鹽25克ACS，95%

CM-R045大鼠小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL一溴二錄烷 BROMODICHLOROMqTHcNq 1972/7/4

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 臺盼藍(lán) Trypan Blue (Dye content, ≥60%) 72-57-1 5G 染色劑

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECD-LDHD-乳酸脫氫酶5克BR，50u/mg

NCI-H226[H226]細(xì)胞，人肺癌細(xì)胞 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞,T24細(xì)胞 人絨毛膜內(nèi)皮細(xì)胞HVCECL-LactateDexy7nogenase 5ku 原裝/10ku 原裝 Sigma L2500
人平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL米爾貝1Milbemycin oxime質(zhì)量規(guī)格：A3+A4>97%

C127細(xì)胞，小鼠細(xì)胞 Y1(腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞) 人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5伐地考昔Valdecoxib質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

CCL14 Protein Human 重組人 CCL14 / HCC-1 / HCC-3 蛋白 (aa 28-93, His 標(biāo)簽)胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素Gastrin I,human 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RKO(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) UDPGA Na；尿苷-5'-二1酸葡糖醛酸三鈉鹽Uridine 5'-diphosphoglucuronic acid tri salt質(zhì)量規(guī)格：≥98%；美國進(jìn)口

人胰腺癌細(xì)胞;AsPC-1替卡西林,替卡西林二鈉Ticarcillin di salt質(zhì)量規(guī)格：BR,二鈉鹽
人肝膽管癌細(xì)胞IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL4-羥基雷美替胺4-Hydroxy Ramelteon質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

MGC80-3人胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells MGC80-3 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS雷美替胺代謝產(chǎn)物M-II (羥基位點(diǎn)R型和S型混合物）Ramelteon Metabolite M-II (mixture of R and S at the hydroxy position)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

IL2 Protein Rat 重組大鼠 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白(S)-酰基萘普生-β-D-葡萄糖苷酸(S)-Naproxen Acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人內(nèi)皮細(xì)胞 (HLEC)( 5×105 ) MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 Mouse(S)-萘普生異酰基-β-D-葡萄糖苷酸(S)-Naproxen Iso-acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

非洲綠猴腎細(xì)胞;GL-37(R)-酰基萘普生-β-D-葡萄糖苷酸(R)-Naproxen Acyl-β-D-glucuronide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，